Цель и задачи исследования:
Целью настоящего исследования является оценка клинической эффективности «Бетулагепата» в комплексной терапии больных персистирующими формами HCV – хроническим гепатитом и циррозом печени (стадии А по Чайлд — Пью).

Основные задачи исследования:

• сравнительная оценка клинико-иммунологической эффективности «Бетулагепата» и базисной терапии больных хроническим гепатитом С;
• изучить эффективность «Бетулагепата» в комплексной терапии больных ХГС с исходом в цирроз печени;
• оценка безопасности препарата

Методы и объем исследования:

Клиническая апробация биологически активной добавки «Бетулагепат» — капсул для приема внутрь проходила в гепатологическом отделении Областной клинической инфекционной больницы г. Воронежа, являющейся клинической базой кафедры инфекционных болезней Воронежской государственной медицинской академии. Работа проводилась в соответствии и Протоколом исследования по теме: «Эффективность применения БАДа Бетулагепат в комплексной терапии больных хроническим вирусным гепатитом С».

Критериями включения пациентов в исследование являлись :

• возраст от 18 до 50 лет;
• верифицированный диагноз хронический вирусный гепатит С и цирроз печени (HCV);
• согласие на лечение и обследование (включая биопсию печени);
• отсутствие сопутствующих заболеваний, оказывающих существенное влияние на течение основной патологии и требующих дополнительных назначений (сахарный диабет, туберкулез, злокачественные опухоли);
• отказ от употребления наркотиков на протяжении последнего года.

Под клиническим наблюдением находилось 65 пациентов, обоего пола (м/ж – 37/28 человек) в возрасте от 18 до 50 лет. По группам больные были разделены следующим образом :

I — первую группу составили 23 больных ВГС умеренной степени активности. Больные 1 группы на фоне базисной терапии получали «Бетулагепат» по 2 капсулы 2 раза в сутки за 15–20 минут до приема пищи в течение 90 дней;

II — во второй группе наблюдались 21 больной хроническим гепатитом С с исходом в цирроз печени на ранней его стадии (стадия А по Чайлд-Пью), больные 2 группы получали «Бетулагепат» по 1 капсуле 2 раза в сутки за 15–20 минут до приема пищи в течение 90 дней.

Наблюдались две группы сравнения – третья (III) и четвертая (IV). Группу 3 составили пациенты ХГС, умеренной степени активности. Группу 4 – больные с циррозом печени стадии А (по Чайлд — Пью). Больные групп сравнения получали базисную терапию, включая ферментативные препараты, симптоматические средства, витамины группы А и Е. Помимо клинического наблюдения за больными, проводился обязательный лабораторный контроль, включающий:

• стандартный клинический анализ крови (общий);
• биохимическое исследование крови с определением общего билирубина и его фракций, осадочных реакций (тимоловая проба), активности АЛТ, АСТ, протромбинового времени; общего белка; альбумина; щелочной фосфатазы.
• определение маркеров ВГС методом ИФА (aHCV IgM, aHCV IgG) с использованием тест-системы DPC-EUROIMMUNE (Германия):а) ПЦР RNA HCV (в 1 группе – количественное определение, во 2 группе — качественное) с использованием тест-системы «ДНК-ТЕХНОЛОГИЯ» (США),б) Определение генотипа вируса С.
• иммунологическое исследование (CD3+, CD4+, CD8+, CD16+, CD20+, ЦИК, фагоцитарный показатель, фагоцитарный индекс, иммуноглобулины М, G, А);
• определение цитокинов с использованием тест-систем BIO SOURCE (Биохимак), ЗАО «ВЕКТОР-БЕСТ».
• биопсия печени с морфологическим исследованием (чрезкожная) иглой Менгини.

Все исследования проводятся перед началом лечения, затем – в динамике: общий анализ крови и биохимические пробыв печени через 30, 60, 90 и 180 дней; ПЦР, иммунограмма, определение цитокинов, УЗИ и пункционная биопсия – через 90 (100 дней).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Оценивалось трехмесячное (90 дней) применение «Бетулагепата» в соответствии с Протоколом.

Полученные в процессе лечения «Бетулагепатом» результаты свидетельствуют его достаточной терапевтической эффективности, особенно у больных хроническим гепатитом С.

Как следует из приведенных данных, у больных, получавших «Бетулагепат» наблюдалось более быстрое исчезновение симптомов общей интоксикации, обусловленной функциональной недостаточностью печени, по сравнению с результатами группы сравнения. Так, уже через месяц лечения биодобавкой, у всех пациентов исчезли слабость, утомляемость, тошнота, тяжесть и боль в правом подреберье, артралгии; нормализовался аппетит, более, чем в 2 раза реже отмечались явления гепато- и спленомегалии.

В группе сравнения указанные патологические проявления сохранялись значительно дольше, а многие вновь появлялись после отмены проводимой терапии.

Результаты биохимических исследований приведены в табл. 3.

табл. 3.

Биохимические показатели крови на фоне лечения «Бетулагепатом» больных с хроническим гепатитом С

	Билирубин				Тимоловая проба		АЛТ		АСТ
	свободный		связанный
	Иссл. группа (n=23)	контр. (n=10)	Иссл. группа (n=23)	Конт-роль (n=10)	Иссл. группа (n=23)	контр. (n=10)	Иссл. группа (n=23)	контр. (n=10)	Иссл. группа (n=23)	контр. (n=10)
До лечения	28,2±13,2	22,4±5,8	31,0±18,1	28,1±10,3	5,5±3,8	7,7±2,5	615,9±73,5↔	518,5±49,8	196,4±198,2	134,7±31,6
Через 1 мес.	15,5±5,3	22,4±5,6	8,6±7,6	18,6±17,2	3,9±2,1	7,5±1,8	247±77,4↔	425,7±69,4	288,2±177,5	206±44,1
Через 2 мес.	14,1±8,2	12,4±1,4	5,7±3,4	8,9±2,4	4,2±1,8	9,0±2,3	237,8±73,1↔	376,4±59,6	183,6±43,8	239,7±44,2
Через 3 мес.	11,3±4,2	11,1±0,8	2,3±2,1	5,7±2,1	3,5±1,7*	8,6±1,6*	136±85,8↔	163,6±64,4	151,3±20,7	230,9±40,9
Через 6 мес.	11,5±1,7	9,6±0,5	1,5±1,1	3,9±1,8	3,1±0,4*	8,8±1,9*	166,4±41,2↔*	380,2±60,2*	124,7±26,1	241,5±38,2

		Общий белок		Альбумин		Щелочная фосфатаза
Протромбиновое время
Иссл.	контр. (n=10)	Иссл.	контр. (n=10)	Иссл.	Контр (n=10)	Иссл.	Контр (n=10)
группа (n=23)		группа (n=23)		группа (n=23)		Группа
						(n=23)
До лечения	19,8±1,2	18,9±1,8	72,1±5,3	69,2±5,2	48,6±3,7	41,2±4,2	283,1±159,2	332,1±185,5
Через 1 мес.	18,5±1,5	17,2±1,9	75,4±4,6	64,3±8,2	50,3±2,8	44,5±3,8	272,4±143,1	321,2±169,3
Через 2 мес.	17,6±0,98	18,5±1,4	71,5±5,9	71,5±8,6	53,4±1,8	49,3±2,6	261,2±126,5	292,1±143,8
Через 3 мес.	17,4±1,1	17,8±1,5	77,9±6,8	71,3±6,1	56,4±1,2	52,6±1,7	229,8±116,5	280,3±113,8
Через 6 мес.	18,1±1,2	18,7±1,9	72,5±5,7	79,4±5,2	57,5±0,8	55,1±0,7	203,2±102,8	224,7±101,2

_{*- достоверное различие показателей (Р<0,05; Р<0,01) между представленными парами данных (основная группа наблюдения – контроль); ↔ — достоверное различие показателей в динамике АЛТ в основной группе наблюдения (Р<0,05; Р<0,01).}

Как следует из результатов исследований биохимических показателей, на фоне применения биологической добавки у всех больных хроническим гепатитом С отмечается быстрое достоверное снижение содержания аминотрансфераз в сыворотке крови уже через месяц от начала лечения (норма АЛТ – 28-189 ммоль/л, АСТ – 35-135 ммоль/л). К концу третьего месяца лечения наступила стойкая нормализация уровня АЛТ, прослеживающаяся и через 6 месяцев (3 месяца после завершения лечения).

После базисной терапии уровень АЛТв контрольной группе претерпевал такие же изменения, но значительное уменьшение показателя наступило после 3-х месяцев лечения, а через 6 месяцев средние значения АЛТ опять возросли и уже в 2 раза превышали норму, а также были достоверно выше аналогичных показателей чем в испытуемой группе.

Выявлены также положительные изменения, характеризующие воспалительно-мезенхимальный синдром: у получавших «Бетулагепат» нормализация тимоловой пробы отмечена в ранние сроки – через 1 месяц от начала лечения. Через 3 и 6 месяцев эти изменения были достоверно отличными от показателей контрольной группы больных (t= 2,19; t=2, 94).

Во второй группе больных (ХГС с исходом в цирроз печени) отмечалась другая динамика показателей аминотрансфераз. Применение «Бетулагепата » привело к снижению уровня АЛТ, но в более поздние сроки, чем в первой наблюдаемой группе больных гепатитом С (табл.4).

Биохимические показатели крови на фоне лечения бетулагепатом больных с ХГС с исходом в цирроз печени

	Билирубин				Тимоловая проба		АЛТ		АСТ
	свободный		связанный
	Иссл. Группа (n=21)	контр. (n=11)	Иссл. Группа (n=21)	Контроль (n=11)	Иссл. Группа (n=21)	контр. (n=11)	Иссл. Группа (n=21)	контр. (n=11)	Иссл. Группа (n=21)	контр. (n=11)
До лечения	22,9±5,6*	22,4±5,8*	19,2±9,9	28,1±10,3	5,8±2,6	7,7±2,5	340±107	211±49	384,2±194,3	159,2±101,1
Через 1 мес.	14,7±2,5	22,4±5,6	4,4±2,1	18,6±7,2	5,8±2,6	7,5±1,8	342±67	325±69	248,1±126,4	154,2±97,6
Через 2 мес.	10,4±0,9*	12,4±1,36	3,1±1,4*	8,9±2,4*	5,1±2,1	9,0±2,3	251±51	376±69	149,5±98,5	97,6±67,6
Через 3 мес.	9,6±0,6*	11,1±0,8	2,8±1,6	5,7±2,1	5,5±2,1	8,6±1,6	239±53	363±64	98,8±67,4	67,2±39,2
Через 6 мес.	9,1±0,2*	9,6±0,5*	1,4±0,9	3,9±1,8	4,7±1,7	8,8±1,9	249±33	380±60	113,6±59,8	87,5±45,1

	Протромбиновое время		Общий белок		Альбумин		Щелочная фосфатаза
	Группа (n=21)	контр. (n=11)	Иссл.	контр. (n=11)	Иссл.	Контр (n=11)	Иссл.	Контр
			Группа (n=21)		Группа(n=21)		Группа (n=21)	(n=11)
До лечения	21,6±9,4	22,1±9,2	53,2±2,6	51,2±1,9	48,1±1,2	47,5±1,1	356,1±178,2	326,8±158,9
Через 1 мес.	20,2±8,4	21,6±8,6	55,8±3,4	53,6±2,4	53,1±2,8	45,8±0,7	333,2±169,1	333,5±169,5
Через 2 мес.	19,4±6,8	21,1±7,5	59,3±4,1	53,9±3,1	55,2±3,4	49,8±2,2	340,5±171,3	301,6±142,3
Через 3 мес.	19,9±7,1	20,9±6,8	63,1±5,9	55,8±4,5	55,9±3,8	51,3±3,5	294,5±149,5	297,8±121,2
Через 6 мес.	18,7±6,7	21,1±7,1	65,3±6,2	56,7±5,2	57,2±4,2	54,2±4,1	256,8±110,2	289,1±110,1
*- достоверное различие показателей (Р<0,05) между представленными парами данных в основной и контрольной группах наблюдения.

Уровень общего билирубина исходно был незначительно повышен в обеих группах, однако, у получавших «Бетулагепат» он имел относительно быструю положительную динамику – достоверно снизился уже через 2 месяца от начала лечения (t=2,205); в контроле снижение было менее демонстративным (критерий достоверности t=2,199 – лишь через 6 месяцев).

Документированы иммуномодулирующие свойства «Бетулагепата» (табл.6).

Табл. 6.

Сравнительная таблица иммунологического статуса

	ХГВС				Цирроз
	До лечения		После лечения		До лечения		После лечения
	абс	отн	абс	отн	абс	отн	абс	отн
СД3	1,2±0,43*	67,4±3,22*	2,8±0,48*	78,0±2,97*	0,9±0,22	43,9±0,64	0,86±0,31	45,1±0,84
СД4	0,6±0,24*	42,1±3,87	1,5±0,25*	39,8±4,17	0,5±0,37	29,0±4,14	0,6±0,21	35,0±3,22
СД8	0,7±0,32	33,2±1,86	0,41±0,29	29,2±1,94	0,4±0,19	21,9±0,95*	0,52±0,89	26,8±1,05*
СД4/8		1,5±0,08		1,45±0,09		1,1±0,04		1,21±0,34
СД11в	0,4±0,19	9,4±1,20	0,3±0,17	13,6±3,30	0,2±0,04	16,1±4,42	0,26±0,06	19,3±3,14
СД16	0,6±0,08	16,4±0,80	0,45±0,12	14,1±1,60	0,3±0,12	14,2±4,84	0,4±0,15	13,3±2,64
СД20	0,3±0,10	9,8±1,17	0,21±0,11	7,3±1,16	0,1±0,05	7,0±0,04*	0,2±0,08	9,1±0,89*
СД95	2,7±0,26*	77,6±2,06*	1,5±0,3*	61,4±3,16*	1,1±0,51	49,1±13,06	1,8±0,13	56,4±11,42
ФП		82,8±3,66		76,8±3,45		67,3±12,13		72,4±10,04
ФЧ		12,7±1,23		8,7±1,12		5,4±0,31		6,2±0,55
ИГС		18,7±3,64		15,7±2,64		7,4±0,50		9,4±0,83
ИГА		2,8±0,64		1,7±0,78		0,7±0,14		0,9±0,23
ИГМ		3,1±0,20		2,1±0,89		0,5±0,06		0,7±0,34
ЦИК		64,2±8,58		46,1±9,51		38,4±4,18		45,3±3,31

_{*- достоверное различие показателей (Р<0,05; Р<0,01) между представленными парами данных}

Норма иммунологических показателей

	х109	%		ФП		65-95
СД3	1,1-1,7	58-76		ФЧ у.е		5-10
СД4	0,4-1,1	36-55		IgGг/л		7-16
СД8	0,3-0,7	17-37		IgАг/л		0,7-4,0
СД4/8				IgМг/л		0,4-2,3
СД11в		21±6		ЦИК у.е		до55
СД16	0,2-0,4	6-26
СД20	0,19-0,38	8-19
СД95		41-63

 

Согласно данным, у больных ХГС, получавших «Бетулагепат», наблюдалась достоверная стимуляция Т-клеточного ответа за счет повышения уровня Т-хелперов. Изначально повышенный уровень нормальных киллеров (НК, или CD16) имел тенденцию к нормализации. До лечения у пациентов с ХГС отмечено также существенное повышение уровня CD95 – лимфоцитов, инициирующих апоптоз (Fas-сигнал); после лечения произошло достоверное снижение абсолютных и относительных показателей CD95 до уровня нормы.

У больных с циррозом печени после приема «Бетулагепата» отмечено достоверное повышение уровня CD8 (в относительных показателях). У этого контингента больных выявлено также достоверное повышение процентного содержания В-лимфоцитов после лечения.

Изменение иммунологического статуса в процессе приема «Бетулагепата», видимо, может быть объяснено как прямым стимулирующим действием на Т-лимфоциты и субпопуляцию лимфоцитов-хелперов, так и опосредованным влиянием — появлением новых возможностей для кооперации клеток на фоне улучшения функции печени и снижения интоксикации.

При исследовании цитокинового профиля у больных всех наблюдаемых групп получены следующие данные (табл.7).

Табл. 7

Сравнительная таблица динамики цитокинов

Группы больных	ФНО (N=2,5 пг/мл)		ИЛ-1β (N=до 5 пг/мк)		ИЛ-10 (N=10±4,2 пг/мк)
	до леч.	после леч.	до леч.	после леч.	до леч.	после леч.
ХВГС(n=23)	3,5±0,9	4,6±1,4	10,2±2,9	16,1±2,8	32,7±8,7	17,7±6,2
ЦП(n=21)	4,2±1,6	5±1,9	11,9±2,6	17±2,4	29,7±8,4	29,8±7,9
Конт ХГС (n=10)	3,3±0,4	3,3±0,6	10,1±3,2	10,5±3,1	16,9±6,8	15,2±7,3
Конт ЦП (n=11)	2,7±0,8	3,2±0,5	9,8±2,8	10,4±2,6	21,4±7,6	21,4±7,9

 

Установлено, что у пациентов с хроническим гепатитом С и пациентов с ХГС и циррозом печени, зарегистрированы повышенные концентрации в сыворотке крови Th1-зависимых цитокинов, ФНО-α, ИЛ-1β и, особенно (и достоверно; соответственно: t=2,35; t=2,10), ИЛ-10 – Th2 цитокина.

В результате проведенной терапии «Бетулагепатом» в обеих исследуемых группах (табл.7) отмечалось некоторое повышение уровня ФНО-α и интерлейкина 1-β, т.е. активация Th1-зависимых показателей иммунитета. Регистрировалась и супрессия средних показателей ИЛ-10 (Th2-зависимого цитокина): после исходно высокого уровня — почти в 2 раза ниже, не достигая уровня нормальных значений, но и не отличаясь от него достоверно.

По данным литературы (Л.Ф.Скляр, 2005), положительный результат противовирусного лечения при ХГС сопровождается активацией Th1-зивисимых показателей. Причем, у больных с изначально низкой концентрацией ИЛ-1β, ФНО-α, противовирусная терапия не дает стойкого терапевтического эффекта (А.С.Журкин, С.В.Соловьев, 1999).

При ультразвуковом исследовании всех больных выявлено умеренное диффузное повышение эхогенности паренхимы печени. У больных 2-ой исследуемой группы (ХГС с исходом в ЦП) отмечалось умеренное увеличение размеров внутрипеченочных желчных протоков и воротной вены.

Проводилось морфологическое исследование биоптатов печени у 6 больных с ХГС, и у 4 ХГС с исходом в цирроз печени. У 2 больных с ХГС после лечения отмечена положительная динамика гистологической картины: снижение индекса гистологической активности (ИГА) и степени фиброза (ГИС) на 1 балл.

Побочных явлений, аллергических реакций на прием «Бетулагепата» не зарегистрировано. Изменений в гемограммах наблюдаемых контингентов больных не зарегистрировано .

Помимо исследований в рамках протокола, «Бетулагепат» был назначен 3 больным ХГС, получающим стандартную противовирусную терапию интерфероном в сочетании с рибавирином и плохо переносящим ее. Назначение «Бетулагепата» позволило существенно уменьшить клинические проявления интоксикации и провести назначенную терапию в полном объеме.

 

Выводы :

• Биологически активная добавка «Бетулагепат» оказывает значительный терапевтический эффект у больных хроническим гепатитом С по сравнению с результатами применения базисной традиционной терапии. Отмечено достоверное снижение сроков интоксикации и уменьшение значений показателей цитолитического синдрома (АЛТ) и тимоловой пробы, доказывая гепатопротективное действие препарата.
• Терапевтический эффект «Бетулагепата» отмечен и у больных хроническим гепатитом С с исходом в цирроз печени (класс А по Чайлд-Пью), но в меньшей степени выраженности положительной динамики патологических симптомов — как клинических, так и лабораторных показателей.
• У больных хроническим гепатитом С наблюдается повышенная концентрация в сыворотке крови CD16 (нормальных киллеров) и CD95 (лимфоцитов, инициирующих апоптоз), а также цитокинов — ФНО-α, интерлейкина 1β и, особенно, интерлейкина 10.
• Под влиянием применения биодобавки «Бетулагепат» у больных ХГС отмечается положительная динамика иммунологических показателей: стимуляция Т-клеточного ответа за счет повышения уровня Т-хелперов, нормализация уровня CD16 и CD95, изменение цитокинового профиля – тенденция к активации Th1-зависимых показателей (ФНО-α и интерлейкина 1-β) и супрессия Th2-зависимого показателя интерлейкина10 – снижение его до нормы.
• У больных ХГС с исходом в цирроз печени после приема «Бетулагепата» отмечено повышение уровня CD8 и CD20 (В-лимфоцитов).
• «Бетулагепат» даже при длительном применении (в течение 3 месяцев) не оказал побочных эффектов.

 

Таким образом, результаты поведенных исследований позволяют рекомендовать биологически активную добавку «Бетулагепат» к применению в клинической практике для лечения больных хроническим гепатитом С и хроническим гепатитом С с исходом в цирроз печени.

 

Зав кафедрой инфекционных болезней ВГМА им Н.Н.Бурденко, доцент

Ю.Г.Притулина