Г.И.Ковалева, Р.М.Салимова, В.П.Жердева, А.К.Сариева, Г.А.Пресноваб, А.Н.Чистяковб
а) НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН, Москва, Балтийская, 8, тел/факс: (495) 6012051, e-mail: g.kovalev@relcom.ru
б) ООО «Берёзовый мир», Москва, 119180 Москва, ул. Б.Полянка, 7/10, строение 3, тел/факс: (495) 785-92-92, 950-82-30, e-mail: info@birchworld.ru
Российской компанией «Березовый мир» (г.Москва) создана серия биологически активных добавок на основе экстракта бересты. Сырье, производимое компанией, — это «Бересты экстракт сухой» (БЭС), содержащий бетулин (тритерпеновый спирт ряда лупана) и ряд других компонентов, сходных по строению и относящихся к тритерпеновым соединениям. И БЭС, и его основное действующее вещество бетулин хорошо изучены в лабораторных исследованиях, проведенных более чем в 20 научно-исследовательских институтах, в т.ч. – НИИ фармакологии им. В.В.Закусова, НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского, ВИЛАР и других. БЭС и его компоненты не обладают общей токсичностью, аллергенными свойствами, мутагенным действием, не являются потенциальным канцерогеном. В условиях эксперимента и в клинических наблюдениях изучены возможности использования препаратов, содержащих экстракт бересты.
Фармакокинетика БЭС была изучена в Лаборатории фармакокинетики (проф.В.П.Жердев, проф.А.К.Сариев) и Лаборатории радиоизотопных методов исследования (проф.Г.И.Ковалёв) НИИ фармакологии имени В.В.Закусова РАМН с использованием меченого по тритию экстракта. Опыты были проведены на 106 белых беспородных крысах-самцах с массой 180-220 г. [3H-G]-бетулин с удельной радиоактивностью 30 мкКи/мг вводили крысам в дозе 100 мг/кг однократно, внутрь. Содержание меченых продуктов определяли в плазме крови, печени, сердце, селезенке, мозге, брыжейке, легких, почках через 0,0; 0,5; 1,0; 2,0; 3,0; 4,0; 6,0; 12,0; 24,0; 48,0; 72,0 и 144,0 часов после введения препарата.
После перорального введения бетулина животным, вещество всасывается из желудочно-кишечного тракта со скоростью 0,017 час-1 (Сmax/AUC) и определяется в плазме крови на протяжении 144 часов исследования. Максимальная концентрация (Сmax) препарата в плазме крови, равная 189,4 мкг/мл, достигается через 3,0 часа. Исследуемое вещество быстрее достигает максимальной концентрации (Tmax — время достижения максимальной концентрации) в мозге и надпочечниках (через 2 часа), медленнее – в мышцах (через 6 часов). Следует отметить, что максимальная концентрация бетулина в плазме крови и органах (кроме мышц) определяется с двумя пиками: через 2-3 часа и через 6 часов. Такая закономерность объясняется присутствием энтерогепатической рециркуляции и активной почечной реабсорбции препарата, что по всей вероятности характерно для бетулина. Значения параметра MRT (среднего времени удержания молекулы вещества) в плазме крови и органах крыс относительно стабильны и представляются в следующей возрастающей последовательности: печень <мозг=мышцы<брыжейка<плазма крови < легкие < почки < надпочечники. Другими словами, бетулин меньше всего задерживается в печени животных и наоборот — дольше задерживается в надпочечниках. Величины площадей под фармакокинетическими кривыми (АUС0®t) свидетельствуют о том, что наиболее высокие концентрации препарата определяются в печени, плазме крови, и наименьшие – в брыжейке. Для остальных органов значения АUС находятся в диапазоне от 5635 до 8424 час х мкг/г.
Максимальное накопление препарата происходит в печени, надпочечниках и почках, наименьшее – в брыжейке, мышцах, мозге и легких. Суммарный коэффициент распределения препарата в интервале до 144 ч указывает на следующую последовательность: печень >> почки ≥ надпочечники > легкие ≥ мозг ≥ мышцы >>> брыжейка. То есть, наибольшее накопление препарата происходит в печени, далее в почках и надпочечниках. В легких, мозге и мышцах препарат распределяется более или менее равномерно. Наименьшее распределение препарата наблюдается в брыжейке. На основании этих данных можно заключить, что препарат накапливается преимущественно в печени, почках и надпочечниках.
Экскреция меченых продуктов с мочой и калом происходит одинаково в первые двое суток и составляет около 20-22 процентов от введенной дозы. Однако, через 72 и 144 часов бетулин выводится с мочой больше (27,7-30,8 %), чем с калом (23,5-24,4 %). Данная закономерность согласуется с фармакокинетическими параметрами кумулятивной экскреции бетулина с мочой и калом, указывающими, чти половина от введенной дозы бетулина экскретируется с мочой и калом. Это позволяет предположить, что препарат неполностью всасывается из желудочно-кишечного тракта. В то же время, можно предполагать возможность существования механизма секреторно-реабсорбционного процесса как в желудочно-кишечном тракте, так и в почках. Косвенным подтверждением этого может служить присутствие двойного концентрационного пика бетулина в плазме крови и органах.
Возможности применения БЭС в гепатологии. Основные терапевтические свойства бетулина – гепатопротекторное и общее цитопротекторное действие, детоксицирующий, десенсибилизирующий, антиоксидантный и антигипоксический эффект. Показано положительное влияние БЭС на активность алкогольпревращающих ферментов — алкогольдегидрогеназы и альдегиддегидрогеназы in vitro, изменение полярности мембраны гепатоцитов, приводящее к активации ферментов детоксикации – цитохрома Р-450 и глютатионтрансферазы in vivo (ВИЛАР, проф. М.Ф.Минеева, В.К.Колхир, Т.А.Сокольская, В.А.Дубинская). Клинические наблюдения подтвердили гепатопротекторное действие БАД «Суперантитокс-50» на основе БЭС (проф.В.Г.Радченко; кафедра внутренних болезней МПФ СПбГМА им. И.И.Мечникова).
В эксперименте in vitro и на мышах, зараженных вирусом гепатита С, показан антивирусный эффект БЭС (проф.П.Г.Дерябин, НИИ вирусологии им. Д.И.Ивановского). Установлены также его интерферониндуцирующие свойства (проф.Н.Н.Носик). На основе БЭС создан БАД «Бетулагепат». Клинические наблюдения проведены в отделе вирусных гепатитов и клинической вирусологии ГУ НИИ вирусологии им.Д.И.Ивановского РАМН на 54 больных хроническим вирусным гепатитом С. «Бетулагепат» назначался в суточной дозе 200 мг или 400 мг в сочетании с рибавирином (800 мг/сут.); курс – 2 месяца (разрешенная максимальная продолжительность непрерывного применения БАД). В ранние сроки купировались явления интоксикации, болевой синдром, уменьшились размеры печени. Отмечена хорошая переносимость «Бетулагепата» и отсутствие отрицательного действия на показатели периферической крови; аллергических реакций не наблюдалось. К окончанию двухмесячного курса лечения «Бетулагепатом» отмечена нормализация уровня аминотрансфераз. Динамическое наблюдение за биохимическими показателями цитолиза показало стабильность достигнутых результатов на протяжении 6 месяцев. Противовирусный эффект к окончанию лечения констатирован у всех пациентов: РНК HCV не определялась (вирус исчез); по истечении 6 месяцев этот эффект сохранился у 70%. Различий клинико-лабораторных показателей в зависимости от дозы «Бетулагепата» не отмечено.
Применение БЭС при туберкулезе легких. Разработан противотуберкулезный БАД «Тубелон», в состав которого вошли БЭС и исландский мох (цетрария). Исследования проведены в ЦНИИ туберкулёза (проф. В.В..Ерохин, О.В.Демихова, В.Ю.Мишин).
В доклинических испытаниях выявлена высокая антибактериальная активность БЭС в отношении микобактерий туберкулеза, положительное влияние на репаративные процессы в тропных к туберкулезной инфекции органах. Отмечена коррекция иммунитета — активация иммунокомпетентных клеток (макрофагов, моноцитов и лимфоцитов).
В клинических испытаниях «Тубелона» наблюдалось 60 больных впервые выявленным деструктивным туберкулезом легких. Стандартную химиотерапию изониазидом, рифампицином, пиразинамидом и этамбутолом сочетали с «Тубелоном» (в двух дозировках). Применение комбинированной химиотерапии с «Тубелоном» позволило на первом месяце лечения в 2 раза эффективнее купировать синдром интоксикации. У 90-95% пациентов, получавших «Тубелон», к концу первого месяца лечения интоксикация исчезла, в контрольной группе явления интоксикации были более стойкими и у 15% пациентов сохранялись даже на третьем месяце лечения. Лучшие показатели наблюдались при применении больших (двойных) доз препарата, это относится ко всем клинико-лабораторным параметрам. В периферической крови отмечено быстрое исчезновение воспалительных изменений. Улучшение самочувствия способствовало повышению аппетита и ранней нормализации показателей массы тела, в большинстве случаев — к концу первого месяца химиотерапии (в контроле – через 2-2,5 месяца). Лучшая переносимость назначенной комбинации 4 противотуберкулезных препаратов у больных, получавших «Тубелон», позволила более полноценно проводить специфическое противотуберкулезное лечение за счет сохранения назначенного режима химиотерапии. Вдвое быстрее, в сравнении с контролем, происходило рассасывание специфических воспалительных изменений в легких и закрытие каверн.
При проведении контрольного бактериологического исследования через 3 месяца после начала лечения у пациентов, получавших «Тубелон», микобактерии туберкулеза не выявлены в 80-90% случаев (в контрольной группе – в 45%). Отмечена также стимуляция Т-и В-клеточного иммунитета и интенсивности РБТЛ.
Таким образом, на основании клинико-рентгенологических и лабораторных данных установлено положительное влияние «Тубелона» на течение деструктивного туберкулеза легких — как в плане ускорения темпов купирования клинических проявлений заболевания, так и рассасывания специфических воспалительных изменений и закрытия каверн в легких.
Противовирусное действие в отношении вирусов «птичьего» гриппа и герпеса. В экспериментах in vitro и на мышах, зараженных вирусами гриппа H5N1 и герпеса, был показан антивирусный эффект БЭС, установлены также его интерферониндуцирующие свойства (НИИ вирусологии имени .Д.И.Ивановского РАМН, проф. С.С.Ямникова). В культуре клеток МДСК и на куриных эмбрионах было показано, что препарат обладает противовирусной активностью. Эти данные послужили основой экспериментов по изучению противовирусной активности БЭС на модели гриппозной пневмонии белых мышей, обусловленной вирусом гриппа А/Н5 N1.
Выживаемость инфицированных мышей, принимающих БЭС в концентрации 200 мг/кг, по сравнению с контролем увеличилась на 50 %. Профилактическое введение препарата сопровождалось значительным снижением интенсивности поражения легких у леченых мышей (единичные очаги) по сравнению с контрольной группой. Кроме того, при применении БЭС отмечена активизация фагоцитоза — как у интактных животных, так и у мышей с гриппозной пневмонией.
Аналогичные данные получены и при экспериментальном изучении герпетической инфекции. Специфических препаратов исключительно для лечения и профилактики гриппа и герпеса у человека ООО «Березовый Мир» пока не выпускает, однако, можно с уверенностью сказать, что любая из 12 биологически активных добавок, содержащих БЭС, оказывает профилактическое и лечебное действие при этих заболеваниях – за счет прямого противовирусного, интерферонстимулирующего и иммуно-модуляторного действия, а также за счет детоксицирующего эффекта. Наиболее рационально в этом плане применение БАДа «Суперантитокс 50», который назначается, как правило, по 1 капсуле (50 мг) 2 раза в день за 15-20 минут до еды.
Фармакологическое тестирование БЭС на психотропную активность проводилось в Лаборатории радиоизотопных методов исследования (проф. Г.И.Ковалёв) НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН. Предварительный скрининг БЭС на мышах С57Вl/6 показал, что экстракт в дозах 25 и 50 мг/кг обладает умеренно активирующим, тимолептическим профилем действия. Углубленный скрининг позволил обнаружить, во-первых, наличие у БЭС, содержащего бетулин, ноотропной, тимолептической и локомоторной активности, представленных в оригинальном сочетании. Преобладающим среди них компонентом на основе имеющихся результатов следует признать ноотропный. Действительно, в тесте поведения «отчаяния» по Порсолту БЭС не проявил самостоятельной активности по отношению к основным показателям — времени иммобилизации и времени активных попыток. Вместе с тем, БЭС существенно улучшал действие препарата сравнения, пиразидола, в механизме действия которого доминирует блокада МАО А и захвата серотонина и норадреналина. Считается, что для истинно ноотропных препаратов класса рацетамов эти эффекты нехарактерны. Однако, оптимизация ими функционирования нейромедиаторных систем, напротив, признается.
Во-вторых, действие БЭС на локомоторную активность сравнимо с эффектами психоаналептика фенамина лишь количественно, так как отсутствие кумуляции при совместном их введении указывает на различные механизмы осуществления их эффектов. Важным подтверждением этого является видимое отсутствие у БЭС синдрома отдачи, характерного для фенаминоподобных психоаналептиков. Напротив, после введения БЭС со временем усиливается выраженность устойчивого тимолептического эффекта.
В-третьих, в спектре фармакологического действия пиразидола, препарата с выраженной антидепрессивной активностью, присутствует эффект потенцирования действия фенамина, оказавшийся нехарактерным для БЭС.
В-четвертых, при изучении влияния БЭС на условные рефлексы в тесте УРПИ на модели скополаминовой амнезии были получены наиболее убедительные данные, свидетельствующие о наличии у препарата ноотропной активности. Действительно, память о наказании в виде электрокожного раздражения сохранялась и через 24, и через 48 часов наблюдения у мышей и с плацебо и с БЭС (25 мг/кг), тогда как защитное действие БЭС против скополамина обнаруживалось через сутки у обеих доз экстракта с высокой степенью статистической достоверности: Р=0,027 по параметру «величина латентного периода первого захода в опасную камеру» и Р=0,001 по параметру «общее время пребывания в светлой камере».
Противопаркинсоническая активность была изучена в Лаборатории радиоизотопных методов исследования (проф. Г.И.Ковалёв) НИИ фармакологии им. В.В.Закусова РАМН.. В экспериментах на 200 мышах-самцах C57Bl/6 было установлено, что Бересты экстракт сухой (БЭС) при введении внутрь в дозе 50 мг, демонстрирует дофамин-миметические и холинолитические свойства в батарее тестов, рекомендованных для обнаружения и доклинического изучения потенциальных противопаркинсонических средств. Так, БЭС более чем вдвое снижал продолжительность каталепсии, вызванной галоперидолом (1 мг/кг, в/б). В экспериментах с п/к введением 25 мг/кг холиномиметика ареколина БЭС противодействовал индуцированному тремору, статистически значимо увеличивая латентный период начала и укорачивая длительность его проявления. Предварительное профилактическое введение БЭС в течение 5 суток полностью защищало мышей от проявления локомоторного дефицита, вызванного острым введением 24 мг/кг нейротоксина 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (МФТП). С другой стороны, при использовании актометра и теста «открытое поле» БЭС при однократном введении частично, но статистически достоверно компенсировал уменьшение количества и ухудшение структуры двигательной активности мышей, с МФТП-индуцированным паркинсоническим синдромом (5х30 мг/кг/день). По выраженности эффектов БЭС не отличался от таковых для клинически используемого противопаркинсонического препарата мидантана (амантадина).
Нейрохимические исследования (проф. Г.И.Ковалёв) показали, что через 2 ч после введения внутрь БЭС приводит к увеличению рецепторов серотонина в коре мозга и NMDA рецепторов в гиппокампе, уменьшает число рецепторов и биосинтез дофамина (ДА) в стриатуме. Через 24 часа в мозге отмечается уменьшение числа рецепторов ДА при возрастании плотности рецепторов серотонина, NMDA и никотина. Не проявляя самостоятельного действия, БЭС потенцирует ингибирующий эффект противопаркинсонического препарата мидантана (амантадина) на пресинаптический транспорт ДА. Видимо, активация ДА-позитивных эффектов экстракта складывается из комплексного воздействия на пресинаптические звенья ДА-нейропередачи, а также компенсаторной стимуляции внутриклеточного метаболизма ДА и СТ через параллельное усиление гетерорецепторого аппарата NMDA- н-холино- и серотониновых проекций из коры больших полушарий и гиппокампа.
